MIKHAIL NAUFAL, - (2022) Ekspresi dan Purifikasi Parsial Interferon-a2b Rekombinan Terlarut di Escherichia coli dengan Sistem Chaperone-Substrate Co-localized Expression (CLEX). Skripsi thesis, UNIVERSITAS AIRLANGGA.

	Text (HAL JUDUL) HAL JUDUL.pdf Download (485kB)
	Text (BAB I) BAB I.pdf Download (46kB)
	Text (FULL TEXT) FULL TEXT.pdf Restricted to Registered users only Download (1MB) | Request a copy

Abstract

Interferon-a2b merupakan protein terapeutik yang berperan dalam pengobatan kanker, seperti leukemia sel berbulu, melanoma, dan karsinoma sel ginjal. Saat ini, Interferon-a2b rekombinan diproduksi dengan menggunakan Escherichia coli sebagai sel inang karena ekonomis dan sederhana. Namun, permasalahan utama dari sistem produksi tersebut adalah terbentuknya badan inklusi. Salah satu sistem ekspresi yang berhasil mengatasi masalah tersebut adalah chaperone-substrate co-localized expression (CLEX). Digunakan sekuen chaperone DnaJ yang disusun secara bi-sistronic dengan sekuen protein rekombinan, sehingga DnaJ dapat segera berinteraksi dengan protein rekombinan. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan kondisi optimum ekspresi Interferon-a2b terlarut dengan sistem CLEX dan memurnikannya secara parsial. Kondisi ekspresi divariasikan terhadap suhu, waktu, dan konsentrasi isopropyl-a-D-thiogalactopyranoside (IPTG). Kondisi ekspresi dilakukan pada suhu 20 oC dan 37 oC. Selanjutnya, waktu inkubasi yang dilakukan adalah 4 jam dan overnight. Ekspresi Interferon-a2b juga diinduksi dengan variasi konsentrasi IPTG 0,1–1,0 mM. Pada hasil visualisasi dengan SDS-PAGE terdapat pita protein dengan berat molekul relatif ±19 kDa yang menunjukan Interferon-a2b. Densitas pita diukur secara semi kuantitatif menggunakan ImageJ. Hasilnya menunjukan bahwa kondisi ekspresi pada suhu 20 oC selama overnight dengan induksi IPTG 0,5 mM memiliki densitas pita paling tebal. Proses purifikasi dilakukan dengan menggunakan kolom Ni-NTA. Berdasarkan hasil kromatogram dan visualisasi SDS-PAGE, Interferon-a2b terlarut berhasil dipurifikasi secara parsial.

Actions (login required)

View Item