CHUMAIRA IFADA, - (2022) PEMBENTUKAN DNA REKOMBINAN ANTARA VEKTOR EKSPRESI pET-30a DENGAN GEN pncA PENYANDI ENZIM PIRAZINAMIDASE DARI Mycobacterium tuberculosis. Skripsi thesis, UNIVERSITAS AIRLANGGA.

	Text (HAL JUDUL) HAL JUDUL.pdf Download (423kB)
	Text (BAB I) BAB I.pdf Download (41kB)
	Text (FULL TEXT) 081811533071.pdf Restricted to Registered users only Download (2MB) | Request a copy

Abstract

"Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari urutan gen pncA M. tuberculosis isolate klinis R1 resisten pirazinamid terhadap isolat H sensitif pirazinamid. Metode yang digunakan adalah teknik subcloning gen pncA ke dalam vektor pET-30a. Pembentukan DNA rekombinan dilakukan melalui penyisipan gen pncA ke dalam vektor ekspresi pET-30a. Gen pncA disisipkan ke dalam vektor ekspresi pET-30a dengan enzim ligase. DNA rekombinan yang terbentuk dimasukkan E. coli TOP10 dalam proses transformasi. Plasmid rekombinan pET-30a-pncA dipotong dengan 2 enzim restriksi yaitu NdeI dan BglII yang menghasilkan 2 fragmen DNA berukuran ±5,4 kb sesuai ukuran pET-30a empty dan ±0,6 kb sesuai ukuran gen pncA. Karakterisasi dilakukan dengan penentuan urutan nukleotida gen pncA menurut metode Sanger menggunakan primer T7 promoter dan terminator. Nukleotida hasil sekuensing disejajarkan dengan urutan nukleotida pembanding gen, yaitu pncAGenBank yang berasal dari M. tuberculosis sensitif obat pirazinamid. Hasil pensejajaran menunjukkan adanya mutasi nukleotida gen pncA dari isolat M. tuberculosis isolat R1, yaitu mutasi T41C, G419A dan A535G. Mutasi nukleotida gen tersebut mengubah urutan asam amino dari protein PZAse yang disandinya, yaitu penggantian asam amino Cis14Arg, Arg140His, dan Ser179Gly. Sementara gen pncA M. tuberculosis isolat H memiliki urutan yang sama dengan pncA GenBank, yaitu isolat sensitif obat pirazinamid. Gen pncA isolat R1 mengalami mutasi dibanding dengan gen pncA dari isolat H dan GenBank. Mutasi yang ada diduga menjadi penyebab munculnya resistensi obat pirazinamid pada isolat R1."

Actions (login required)

View Item