Direct Cloning of Melanoma Natigen 1 (MAGE-1) and the E2 Gene of Hog Cholera Virus (HCV) From The Blund End PCR Product Using pET101/D-TOPO Repository

Direct Cloning of Melanoma Natigen 1 (MAGE-1) and the E2 Gene of Hog Cholera Virus (HCV) From The Blund End PCR Product Using pET101/D-TOPO

Mastutik, Gondo and Situmeang, Rosmelati (2013) Direct Cloning of Melanoma Natigen 1 (MAGE-1) and the E2 Gene of Hog Cholera Virus (HCV) From The Blund End PCR Product Using pET101/D-TOPO. Folia Medica Indonesiana, 49 (2). pp. 101-108. ISSN 0303-7932

Preview

Text (Fulltext)
karil7. Direct_Cloning.pdf
Download (2MB) | Preview

Text (Peerreview)
peerreview7-DirectCloning.pdf
Restricted to Registered users only
Download (815kB) | Request a copy

Official URL: http://journal.unair.ac.id/download-fullpapers-fmi...

Abstract

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengkloningkan seluruh area koding gen Mage-1 dan gen E2 Virus Hog Cholera (VHC) menggunakan plasmid pET 101/D-TOPO dan untuk mendapatkan plasmid rekombinan Mage-1dan E2. Sampel diperoleh dari jaringan liver penderita karsinoma hepatoseluler dan jaringan limfa babi yang terinfeksi VHC dari Sukoharjo Jawa Tengah. cDNA diamplifikasi dengan Polymerase Chain Reaction (PCR) menggunakan primer GMTOPOF-GMTOPOR untuk gen Mage-1 dan RS-1- RS-2 untuk gen E2 VHC. Produk PCR yang telah dipurifikasi dikloningkan ke pET101/D-TOPO sebagai vektor ekspresi dengan cara kloning langsung. Plasmid rekombinan yang mengandung gen target ditransformasikan ke E. coli Top10. Analisis plasmid rekombinan dilakukan dengan sekuensing dan analisis enzim restriksi. PCR gen Mage-1 menghasilkan produk +1105pb untuk first round dan +931pb untuk second round. PCR gen E2 menghasilkan produk + 1200 bp. DNA target dikloningkan ke pET101/DTOPO dari produk PCR dengan ujung tumpul secara langsung. Sekuen seluruh are koding gen Mage-1 mengandung 927 nukleotida yang mengkode 309 asam amino. Sekuen seluruh area koding gen E2 VHC mengkode 1218 nukleotida. Enzim EcoRV memotong vektor pET101/D-TOPO pada nukleotida posisi 545 dan 4775 bp. Hasil dari restriksi EcoRV yaitu pita dengan panjang 4230 pb dan 2450 pb untuk plasmid rekombinan pETGM/MAGE1-HCC dan 4200 pb dan 2700 pb untuk pETRS/E2-SH. Plasmid rekombinan pETGM/MAGE1-HCC dan pETRS/E2-SH telah diperoleh dari produk PCR dengan ujung tumpul secara langsung menggunakan plasmid pET101/D-TOPO.

Item Type:

Article

Uncontrolled Keywords:

kloning langsung, gen Mage-1, gen E2 Virus Hog Cholera, pET101/D-TOPO

Subjects:

R Medicine > R Medicine (General) > R735-854 Medical education. Medical schools. Research

Divisions:

01. Fakultas Kedokteran > Patologi Anatomi

Creators: