NUR HALIMAH (2019) KONSTRUKSI PUSTAKA EKSPRESI METAGENOM PROKARIOTIK DARI SISTEM PENCERNAAN Achatina fulica UNTUK EKSPLORASI DAN KARAKTERISASI LAMINARINASE. Thesis thesis, UNIVERSITAS AIRLANGGA.

Text (FULLTEXT) 317. TESIS Nur Halimah_081714253006.pdf Restricted to Repository staff only Download (2MB) | Request a copy

Abstract

Laminarinase adalah enzim yang menghidrolisis substrat laminarin, suatu polisakarida yang tersusun atas ikatan β-1,3 glikosidik yang diselingi oleh ikatan β-1,6 glikosidik. Laminarinase masuk dalam beberapa kelompok EC number, antara lain endo-β-1,3(4)-glukanase (EC. 3.2.1.6) endo-1,3-β-D-glukanase (EC 3.2.1.39) dan endo-β-1,6-glukanase (EC 3.2.1.75). Enzim-enzim tersebut banyak dimanfaatkan dalam bidang industri pertanian, makanan dan kesehatan. Oleh karena itu, diperlukan ekplorasi laminarinase yang memiliki kebaruan dan karakteristik yang memenuhi kebutuhan industri. Penelitian ini bertujuan untuk eksplorasi dan karakterisasi gen laminarinase dari hasil konstruksi pustaka ekspresi metagenom prokariotik dalam sistem pencernaan A. fulica. Konstruksi pustaka ekspresi metagenom dilakukan dengan menggunakan λTriplEx2 yang diligasi dengan fragmen DNA metagenom, kemudian ditransduksi ke dalam E. coli XL1-Blue. λTriplEx2 rekombinan yang diperoleh dikonversi ke pTriplEx2 rekombinan dengan menggunakan E. coli BM25.8. Ekspresi gen laminarinase diinduksi oleh IPTG dalam media yang mengandung laminarin. Pada penelitian ini telah dikonstruksi pustaka ekspresi metagenom prokariotik dari sistem pencernaan Achatina fulica dengan efisiensi yang tinggi, ditunjukkan oleh nilai titer sebesar 1,41 x 109 Pfu/ mL. Terdapat 4 koloni E. coli BM25.8 rekombinan yang mengekspresikan laminarinase yang berbeda, gen laminarinase rekombinan tersebut yaitu [pTriplEx2_Lam8], [pTriplEx2_Lam10], [pTriplEx2_Lam13], dan [pTriplEx2_Lam14]. Karakteristik laminarinase yang diekspresikan oleh E. coli BM25.8 rekombinan [pTriplEx2_Lam10] memiliki aktivitas optimum pada temperatur 60oC dan pH 6,0 dengan aktivitas sebesar 8,74 ± 0,13 U/ mL serta laminarinase mampu menghidrolisis ikatan β-1,3 dan β-1,6 glikosidik secara sinergis yang ditunjukkan oleh adanya aktivitas pada tiga jenis substrat: laminarin, β-1,3-glukan dan 1,6-anhydro-β-D-glucose. Berat Molekul (BM) laminarinase sekitar 113 KDa dengan perkiraan jumlah asam amino dan pasang basa DNA berturut-turut adalah 1028 unit asam amino dan 3084 pb.

Actions (login required)

View Item