MARIJAM PURWANTA, 090710362 D (2013) EPITOP PADA PROTEIN 18-kDa Mycobacterium leprae SEBAGAI KANDIDAT MARKA DIAGNOSTIK PROGNOSTIK REAKSI REVERSAL PADA PASIEN KUSTA. Disertasi thesis, UNIVERSITAS AIRLANGGA.

Preview	Text (ABSTRAK) gdlhub-gdl-s3-2015-purwantama-34812-7.abstr-k.pdf Download (417kB) | Preview
	Text (FULLTEXT) 35.pdf Restricted to Registered users only Download (1MB) | Request a copy

Abstract

Kecacatan akibat penyakit kusta disebabkan terjadinya reaksi reversal. Patogenesis reaksi tersebut dipicu oleh protein terutama 18-kDa Mycobacterium leprae.Tujuan penelitian: 1) pencirian protein 18-kDa Mycobacterium leprae dan epitopnya dari galur bakteri isolat pasien kusta yang berasal dari daerah Surabaya; 2) menganalisis peningkatan kadar sitokin IFN- antara kultur limfosit dari pasien kusta borderline yang dipapar protein rekombinan 18-kDa Mycobacterium leprae dibandingkan dengan kultur limfosit tanpa paparan; 3) menganalisis penurunan kadar sitokin IL-4 antara kultur limfosit dari pasien kusta borderline yang dipapar protein rekombinan 18-kDa Mycobacterium leprae dibandingkan dengan kultur limfosit tanpa paparan; 4) menganalisis rasio kadar sitokin IFN-/sitokin IL-4 pada kultur limfosit dari pasien kusta borderline yang dipapar protein rekombinan 18-kDa Mycobacterium leprae dengan kultur limfosit tanpa paparan. 5) menganalisis tingkat akurasi diagnostik rasio IFN-γ/IL-4 dengan paparan protein 18-kDa Mycobacterium leprae, pada prognostik reaksi reversal pada pasien kusta borderline. Metode: Gen penyandi protein 18-kDa Mycobacterium leprae diisolasi dari isolat penderita kusta multibasiler lokal lewat metode PCR, pita DNA ukuran berkisar 450 bp; DNA penyandi protein 18-kDa Mycobacterium leprae diinsersi ke dalam vektor ekspresi pET 101/D-TOPO® dan transformasi ke Escherichia coli BL21 starTM (DE3). Ekspresi protein rekombinan 18-kDa Mycobacterium leprae dimurnikan menggunakan kolom Ni-NTA pada BiologicTM Chromatography Systems dengan software BioLogic DuoFlow Version 5.2 (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Pemurnian protein rekombinan 18-kDa Mycobacterium leprae dianalisis menggunakan SDS-PAGE. Analisis epitop protein 18-kDa Mycobacterium leprae menggunakan metode in silico. Protein rekombinan 18-kDa Mycobacterium leprae digunakan untuk uji restimulasi sel T pasien kusta borderline dengan dan tanpa reaksi reversal, diukur kadar IFN-γ dan IL-4. Hasil: Analisis sekuens DNA penyandi 18-kDa Mycobacterium leprae 447 bp 100% homolog dengan gen Mycobacterium leprae strain TN; protein 18-kDa Mycobacterium leprae mempunyai massa molekul relatif 16,607-kDa dan dikemas dalam plasmid pET-18ML; pada penelitian ini diperoleh tujuh epitop baru pada protein 18-kDa Mycobacterium leprae; peningkatan rasio IFN-γ/IL-4 tiga kali pada kelompok RR setelah paparan dibandingkan sebelum paparan (p< 0,001). Kesimpulan: epitop pada protein 18-kDa Mycobacterium leprae dapat digunakan sebagai kandidat marka diagnostik prognostik reaksi reversal pada pasien kusta.

Actions (login required)

View Item