NESIA RAHMANDANI IMASELFI, 081511533084 (2019) IDENTIFIKASI RESIDU-RESIDU KATALITIK α-L-ARABINOFURANOSIDASE Dictyoglomus thermophilum H-6-12 DENGAN METODE SITED DIRECTED MUTAGENESIS. Skripsi thesis, UNIVERSITAS AIRLANGGA.

	Text MPK. 89-19 Ima i abstrak.pdf Download (175kB)
	Text MPK. 89-19 Ima i daftar isi.pdf Download (128kB)
	Text MPK. 89-19 Ima i daftar pustaka.pdf Download (130kB)
	Text (FULLTEXT) MPK. 89-19 Ima i.pdf Restricted to Registered users only until 21 October 2022. Download (2MB) | Request a copy

Abstract

Enzim α-L-arabinofuranosidase yang berasal dari bakteri termofil Dictyoglomus thermophillum (Dt-Ara1) merupakan enzim xilanolitik. Dt-Ara1 dikelompokkan dalam famili GH51 dimana terdapat 2 asam amino glutamat yang berperan sebagai residu katalitik. Berdasarkan multiple sequence alligment dengan enzim α-L-arabinofuranosidase famili GH51 lainnya, diduga asam amino glutamat173 dan glutamat 301 adalah residu katalitik Dt-ara1. Pada penelitian ini, asam amino yang diduga sebagai residu katalitik dimutasi menjadi asam amino alanin dan dieskpresikan ke dalam sistem ekspresi E. coli BL21-pET-15b. Dt-Ara1 mutan dimurnikan dengan kromatografi afinitas menggunakan kolom HisTrap. Analisa SDS-PAGE menunjukkan hasil yang didapat belum murni sehingga dilanjutkan pemurnian dengan kromatografi penukar anion. Hasil SDS-PAGE menunjukkan didapatkan protein yang lebih murni dari pemurnian sebelumnya. Untuk mengkonfirmasi apabila asam amino glutamat 173 dan glutamat 301 adalah residu katalitik Dt-ara1, dilakukan perbandingan hasil uji aktivitas. Pada Dt-Ara1 mutan Glu-173-Ala menunjukkan terjadi penurunan aktivitas signifikan dibandingkan dengan jenis rekombinan, yaitu dari 24832 U/mg-1 Menjadi 695,6 U/mg-1 , sedangkan Dt-Ara1 mutan Glu-301-Ala tidak ada aktivitas. Hal ini menunjukkan bahwa asam amino glutamat173 dan glutamat301 adalah residu katalitik enzim Dt-Ara1

Actions (login required)

View Item